目的:构建人泛素样修饰子(hUBL)基因的逆转录病毒载体并转染293T细胞,以探讨其生物学功能。方法:将hUBL克隆到原核表达质粒PET28a中,构建重组质粒PET28a-hUBL,转化BL21菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用其纯化蛋白免疫小鼠,获得多克隆抗体。重组蛋白用Western blot.鉴定。将hUBL基因克隆到逆转录病毒质粒中并转染293T细胞,用免疫组化染色法鉴定hUBL基因的表达。结果:hUBL在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了hUBL-PET28a的融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗hUBL蛋白的小鼠多克隆抗体。免疫组化染色表明,hUBL重组逆转录质粒可在293T细胞中高效表达hUBL蛋白。结论:成功地构建了hUBL重组逆转录病毒载体,使得其在293T细胞中表达,获得稳定表达的细胞株。

国家自然科学基金资助项目(2003,30370539);

人泛素样修饰子(hUBL); 基因克隆; 蛋白表达; 逆转录病毒载体; 293T细胞;

R346

71332-334+350-25933k
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