人精子有效抗原基因表达克隆的研究

沙家豪周作民胡志刚王黎熔林敏张适王一飞

我们从人睾丸组织中提取RNA,并进一步纯化出mRNA;以此为模板,在反转录酶和DNA多聚酶的作用下,合成cDNA;将cDNA与λgII载体重组后转染大肠杆菌,构建人睾丸cDNA表达文库。运用遗传显色法和噬菌斑原位杂交法鉴定表达文库后,用兔抗人精子抗体筛选人精子抗原基因表达克隆(HSG)。对HSG表达抗原(HSGAg)和特异抗体(HSGAb)进行纯化和抗生育效应的测定。结果显示:(1)人睾丸cDNA表达文库容量为1.82Xl06pfu,遗传显色法示重组率为67%,噬菌斑原位杂交法示重组率为51%。(2)经兔抗人精子抗体筛选2Xl04pfu,得8株人精子抗原基因表达克隆。(3)人血清、兔血清HSG2Ab和兔血清HSG8Ab对人精子具有补体依赖细胞毒作用。(4)兔血清HSG3Ab能阻断人精子在顶体反应时顶体后区ConA受体的暴露。结果提示,HSG2、HSG3和HSG8克隆的表达抗原是精子有效抗原,能作为精子免疫避孕疫苗的候选成分。

睾丸; 精子; 抗原; 基因表达;

R392.1

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